二苯胺试剂鉴定dna的原理（二苯胺试剂鉴定DNA的原理啥色）

二苯胺法测DNA

原理�DNA分子中的脱氧核糖基，在酸性溶液中变成ω–羟基–γ–酮基戊醛，与二苯胺试剂作用生成蓝色化合物（λmax=595）。在DNA浓度为20～200μg/ml范围内，吸光度与DNA浓度成正比，可用比色法测定。在反应液中加入少量乙醛，可以提高反应灵敏度。除DNA外，脱氧木糖，阿拉伯糖也有同样的反应。其他多数糖类，包括核糖在内，一般无此反应。操作步骤�标准曲线的绘制 按下表加入各种试剂，混匀，于60℃恒温水浴保温45min,冷却后，在595nm波长下，进行比色测定，以DNA浓度为轮段或横坐标，光吸收值为纵坐标，绘制标准曲线。管号试剂012345标准DNA溶液/ml0.00.40.81.21.62.0蒸馏水/ ml2.01.61.20.80.40二苯胺试剂/ ml4.04.04.04.04.04.0A595nm样品的测定 取2支试管，各加DNA样液1.0，蒸馏水1.0ml，混匀。然后准确加入二苯胺试剂4.0ml，混匀，于60℃恒温水浴保温45min ，冷却后，选595nm波长，于722分光光度计上比色测定，根据所得的吸光度对标准曲线求得DNA的质量（μg）。DNA含量的计算 根燃者据测得的光吸收值，从标准曲线上查出相当该光吸收值DNA的含量，按下式计算出样品中DNA的含量。W= m1/m2×100%式中W：DNA的质量分数（%）；m1：样液中测得的DNA的质量（μg）；m2：样液中所含样品的质量（μg）；试剂和器材�一、试剂�1. DNA标准溶液（200μg/ml）：取小牛胸腺DNA钠盐以0.01mol/L氢氧化钠溶液配置成200μg/ml的溶液。2. DNA样液：准确称取DNA干制品以0.01mol/L氢氧化钠溶液配置成100μg/ml左右的溶液。3. 二苯胺试剂：称取纯二苯胺（如不纯，需在70%乙醇中重结晶2次）1g溶于100ml分析纯的冰醋酸中，再加入10ml过氯酸（A.R.,60%以上），混匀待用。当所用药品纯净时，配得试剂应为无色，临用前加入1ml1.6%乙醛溶液（乙醛溶液应保存于冰箱中，一周内可使用），贮于棕色瓶。0.01mol/L NaOH溶液 5. 冰醋酸。6. 过氯酸。7. 1.6%乙醛溶液。二、器材�1.坐标纸腊伍。2. 吸管0.20ml、0.50ml、1.0ml。3. 试管1.5cm×15cm。4. 722型分光光度计。5. 恒温水浴锅标准曲线见

到底用什么来鉴定DNA 甲基绿还是二苯胺

用甲基绿来鉴定DNA。DNA遇甲基绿（常温）会被染成蓝绿色。

甲基绿是雀扮具培纤有金属光泽的绿色微结晶或亮绿色粉末。溶于水，显蓝绿色。为碱性染料，它易与聚合程度高的DNA结合呈现绿色。

又称双绿SF。绿色晶体，具金黄色光泽，或淡绿色粉末。溶于水，呈蓝绿色。微溶于乙醇，不溶于乙醚、戊醇。

扩展资料：

甲基绿操作注意事项：

1、操作人员应经过专门培训，严格遵守操作规程。

2、操作处置应在具备局部通风或全顷中灶面通风换气设施的场所进行。

3、避免眼和皮肤的接触，避免吸入蒸汽。

4、远离火种、热源，工作场所严禁吸烟。

5、使用防爆型的通风系统和设备。

6、如需罐装，应控制流速，且有接地装置，防止静电积聚。

7、避免与氧化剂等禁配物接触。

8、搬运时要轻装轻卸，防止包装及容器损坏。

9、倒空的容器可能残留有害物。

10、使用后洗手，禁止在工作场所进饮食。

11、配备相应品种和数量的消防器材及泄漏应急处理设备。

参考资料来源：百度百科-甲基绿

参考资料来源：百度百科-脱氧核糖核酸

二苯胺与DNA反应的本质

二苯胺与DNA反应的本质：DNA在酸性条件下加热，其嘌呤碱与脱氧核糖间的糖苷键断裂，生成嘌呤碱、脱氧核糖和脱氧嘧啶核苷酸，而2-脱氧核糖在酸性环境中加热脱水生成ω-羟基-γ-酮基戊醛，后者与二苯胺试剂反应生成蓝色物质。

二苯胺的乙醇溶液加入9体积的浓硫酸（形成强酸性溶液）配制成二苯胺试剂，本试剂遇硝酸盐或硝酸产生蓝色的苯胺蓝沉淀，可用于鉴定硝酸盐。

扩展资料：

二苯胺试剂：

A液：1.5克二苯胺溶于100ml冰醋酸中，再加1.5ml浓硫酸，用棕色瓶保存（光下分解）。如冰醋酸呈结晶状态，则需加温后待其熔化再使用。

B液：体积分数为0.2%的乙醛溶液(CH3CHO)。

配制：将0.1mlB液加入10mlA液中，煮沸观察显色。

合成方法：

1、苯胺盐酸盐法：由苯胺与苯胺盐酸盐缩合而得。

2、三氯化铝催化法：以苯胺为原料，三氯做拿化铝为催化剂，经缩合反应而得。

3、苯酚缩合法：采用HD92催化剂，由苯酚与苯胺缩合而得。

4、苯胺以无水三氯化铝为催化剂，进行缩合反应。反应产物经盐酸盐析、氢氧化钠中合、和则煮洗、真空蒸馏、用乙醇结晶、分离即得成品。

5、工业二苯胺经精制制得。

6、用纯棚搭氰化钾洗涤工业二苯胺，与铁、其他金属络合后，与二苯胺分开。

7、在氮气流中把二苯胺减压蒸馏即得成品。

参考资料来源：百度百科-二苯胺

二苯胺试剂鉴定dna错误的原因

其鉴定原理基于二苯胺能够与缺失的核苷酸形成磷酸亚胺，并与DNA中的未配对碱基生成特定的化学染色野枝盯反应，显色程度与未配对的碱基数量成正比。因此，二苯胺试剂的检测结论受到多种因素的影响，如试剂的质量、反应条件、DNA质量、存储条件等等。此外，DNA样搭和本可能包含各种杂质，颂和如酶、盐等，这些杂质可能干扰试剂的正常反应，导致检测结果不准确。因此，在使用二苯胺试剂鉴定DNA时，需要注意检验环境与条件，同时，需保证DNA样本的纯度和完整性。

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